1. 空气空白\水空白：一般是用于仪器调零的,所有孔数值减掉该孔数值。
2.底物空白：一般是用于防止底物弱显色所造成的读数偏高，同样所有孔数值减掉该孔数值（只加底物和终止液）
3. 酶空白：一般在2步法实验中使用，主要是看酶是否和板有非特异性结合的，一般不做这个 。
ELISA试剂盒空白孔一般设一个，这是为了减除显色液的OD值。而阴性和阳性标准品最好是设2个复孔，虽然有点浪费，但为了确保实验的可靠性，我认为还是很有必要的。ELISA试剂盒空白孔加什么？一般两个做法，看个人习惯或者说看你们实验室的习惯：
1，什么都不加，然后那个孔按照操作流程来做，这个说法的根据就是空白，也就是什么都没有。
2，加样本稀释液，然后按照操作流程来做。这个做法的根据就是只要不含阳性物质就算是空白的，加入样本稀释液的目的是为了使这个孔除了在没有阳性物质上其他的都与其他孔一致。
ELISA试剂盒注意事项：
1、血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。
2、 血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。
3、一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。
