一、可恢复的情况（轻度失活）
1. 标准品（冻干粉 / 浓缩液）
复溶与重配：用原装复溶缓冲液，轻柔涡旋（避免气泡），室温静置 15–30 min，4℃过夜平衡后再用。
分装防反复冻融：复溶后分装成 5–10 μL 小份，-20℃保存，每次只用 1 份。
活性验证：用已知阳性样本做1–2 点质控，OD 值落在标准曲线范围内即可用。
2. 酶结合物（HRP - 抗体）
离心回收：开盖前瞬时离心（5–10 s），把管壁液体甩回底部，避免浓度损失。
温和回温：从 - 20℃取出→4℃ 1 h→室温 30 min，严禁 37℃快速解冻。
避光保护：HRP 对光敏感，全程铝箔包裹，减少光照失活。
轻度浓缩（信号低时）：按原浓度 1.25–1.5 倍浓缩（减少稀释液），仅应急用。
3. TMB 显色液
氧化恢复：若淡蓝 / 浅黄（轻微氧化），4℃避光静置 2–4 h，或加0.1% 抗坏血酸（现配），可部分还原。
绝对避光：显色全程铝箔覆盖，避免强光直射。
4. 洗涤液（浓缩液结晶）
37℃水浴：结晶析出属正常，37℃温浴至完全溶解，再按 1:20 稀释，不影响活性。
二、有限恢复的情况（中度失活）
信号偏低（OD＜0.5）：
延长孵育：抗体孵育 + 30 min、TMB 显色 + 5–10 min（不超过说明书上限）。
提高浓度：酶结合物 / 检测抗体浓缩至原浓度 1.5–2 倍（仅应急）。
优化温度：孵育温度升至 37℃（若原 25℃），增强免疫结合。
背景偏高（非特异性结合）：
增加洗板：洗板次数 + 2–3 次，每次浸泡 1–2 min，减少游离干扰物。
封闭增强：用5% BSA替代原装封闭液，封闭时间延长至 1 h。
三、不可恢复的情况（直接弃用）
酶结合物 / 标准品浑浊、絮状沉淀、蛋白析出（蛋白变性）。
TMB深蓝 / 黄色（严重氧化）。
试剂反复冻融＞3 次、过期＞1 个月、曾 - 80℃冷冻（酶 / 抗体不可逆变性）。
酶标板受潮、发霉、包被层脱落。
四、预防优先（避免失活）
保存：未开封2–8℃；酶结合物 / 标准品分装 - 20℃，严禁冷冻 TMB。
操作：全程避光、无菌、一次性枪头，避免交叉污染。
开封后：1 周内用完，密封 + 干燥剂，4℃保存。
五、快速判断流程
外观：清澈→可试；浑浊 / 沉淀 / 变色→弃用。
质控：用已知阳性样本测 OD，落在标准曲线内→可用；无信号 / 信号极低→弃用。
