一、物理隔离（*关键）
严格 三区分开，绝对不能混用：
试剂准备区（配液区）：只放水、buffer、引物、dNTP、酶
样本处理区：加模板
扩增 & 电泳区：PCR 产物、胶、电泳仪
⚠️ 严禁：
从 产物区 拿任何东西回 配液区
穿产物区的白大褂进配液区
枪、枪头盒、离心机、笔、本子 完全分开
二、操作习惯
配液 永远在超净台 / 通风橱，开紫外
加样顺序：水 → buffer → 引物 → dNTP → 酶 → *后加模板
枪头 一次性，吸产物必须带滤芯枪头
开盖 PCR 管要 慢开、轻开，防止气溶胶喷溅
不要在配液区 大声说话、咳嗽、打喷嚏
三、试剂层面防污染
使用 UNG 酶 + dUTP 体系（*有效）
原理：新产物用 U 代替 T，污染的旧产物会被 UNG 降解
引物、酶、水分装成小管，避免反复冻融 & 多次开盖
每次必设：空白对照 NTC（无模板只加水）
四、清洁消毒
台面：10% 次氯酸钠 → 75% 乙醇 顺序擦拭
移液器：喷 75% 乙醇或专用 DNA 去污剂
超净台：每次用完 紫外照射 30min+
废弃 PCR 管：密封丢弃，不要在实验室开盖久放
五、一旦污染怎么救
停止所有实验
全实验室次氯酸钠 + 乙醇彻底擦
更换所有试剂（水、引物、buffer *容易藏污染）
只开新枪头、新管子
先跑 NTC，确认干净再恢复
极简总结（记住这 5 条就够）
三区绝对分开，不混用物品
配液*后加模板
必用 UNG/dUTP
全程 滤芯枪头
NTC 阴性才能信结果
