实时荧光定量PCR（qPCR）通过在扩增过程中实时监测荧光信号实现定量。与非特异性的SYBR Green染料法不同，探针法依赖序列特异性寡核苷酸探针，其两端标记荧光基团与淬灭基团，利用PCR反应中探针结构或位置的改变（如水解、杂交开环）调控荧光信号，从而大幅提升检测特异性与信噪比。

 

    实时荧光PCR（qPCR）中常用的探针类型主要包括‌TaqMan探针、TaqMan MGB探针、分子信标探针、杂交探针、双淬灭探针、LNA探针以及蝎形探针‌等，其中以TaqMan系列应用*为广泛。

一、TaqMan探针（经典水解探针）

‌结构特点‌：为双标记寡核苷酸，5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团（如TAMRA）。完整时因荧光共振能量转移（FRET）无信号；PCR扩增中被Taq酶5'→3'核酸酶活性降解后释放荧光信号。

‌优势‌：特异性强，适用于多重检测和高通量分析。

‌典型应用‌：病原体RNA检测、基因表达定量、SNP分型等。

二、TaqMan MGB探针（Minor Groove Binding Probe）

‌结构升级‌：在传统TaqMan探针基础上，3'端增加一个小沟结合物（MGB），可提高探针熔解温度（Tm），允许使用更短序列（通常<20 bp）仍保持高特异性。

‌优势‌：

更高的特异性和灵敏度，尤其适合区分高度同源序列或SNP位点；

本底信号更低，Ct值更稳定，重复性更好；

推荐用于等位基因分型，特别是当常规探针过长时。

三、其他常见探针类型

  

 

四、选择建议：根据检测需求匹配探针类型

‌常规基因表达分析‌ → 优先选用‌TaqMan MGB探针‌，灵敏度高、重复性好；

‌SNP或突变位点检测‌ → 推荐‌TaqMan MGB探针或分子信标‌，可精准区分单碱基差异；

‌多重qPCR‌ → 可选‌TaqMan探针+不同荧光通道组合‌，实现多靶标同步检测；

‌极端条件或复杂背景‌ → 考虑‌双淬灭探针或LNA探针‌，提升信噪比和稳定性。