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抗体和重组蛋白的稳定性的关系

点击次数:34次     发布时间:2026/2/2 11:09:16

      抗体是免疫系统经数亿年进化形成的“高鲁棒性”蛋白,其保守的Ig折叠结构赋予极高的热稳定性(Tm≈70℃)和抗蛋白酶能力;而重组蛋白是人工表达产物,其稳定性由氨基酸序列、翻译后修饰(如糖基化)、是否含保护剂等多重人为因素决定,尤其原核表达的无糖基化蛋白更易聚集失活。

     抗体和重组蛋白的稳定性虽受不同因素影响,但二者在保存条件、纯度、浓度及结构特性上存在密切关联,共同决定其生物活性和实验重复性。

一、影响稳定性的共性因素
纯度与浓度‌
高纯度和高浓度是维持抗体和重组蛋白稳定的关键。高纯度可减少杂质蛋白的干扰,避免非特异性结合或降解酶的影响;而高浓度(通常为1 mg/ml)能降低管壁吸附造成的损失,增强分子间相互作用,提升整体稳定性。
 
‌保存形式与温度‌
 
‌抗体‌:建议分装后保存于-20℃,避免反复冻融导致的构象变化和活性下降。
‌重组蛋白‌:更敏感,需分装后保存于-80℃,尤其真核细胞表达的溶液态蛋白,对温度波动更为敏感。
‌冻干粉‌:原核表达的重组蛋白常以冻干粉形式保存,稳定性强,在-80℃可保存数年,但溶解方式直接影响其复性效果。

结构稳定性‌
抗体本身具有高热稳定性(Tm值高),在室温甚至短时50~60℃仍能保持正确折叠和活性,这是长期自然进化的结果。而重组蛋白的稳定性则高度依赖表达系统:
真核系统(如哺乳动物细胞)可完成翻译后修饰,确保空间结构正确,从而提高稳定性;
原核系统表达的蛋白虽产量高,但缺乏修饰能力,易形成包涵体,稳定性较差。

二、稳定性关系的核心机制
‌抗体稳定性对抗原-重组蛋白检测的影响‌
在ELISA等检测中,包被抗体的稳定性直接影响其与抗原(如重组蛋白)的结合效率。抗体稳定性越高,其在包被过程中保持天然构象的比例越大,表观亲和力越强,检测灵敏度和重复性也越好。
 
‌重组蛋白作为抗原时的稳定性反馈‌
若重组蛋白结构不稳定或发生聚集,可能导致抗体识别表位丢失,出现假阴性或信号衰减。因此,重组蛋白的稳定性不仅关乎自身功能,也反向影响抗体的检测效能。
 
三、操作建议提升整体稳定性
‌收货后立即处理‌:收到样品后,在4℃、12000rpm离心3~5分钟,确保管壁残留物完全沉降。
‌严格分装‌:按单次用量分装(≥10 µl/份),避免反复冻融。
‌遵循说明书‌:不同产品可能有特殊保存要求,务必仔细阅读厂商说明。

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