扩增曲线的四个阶段及原理
1. 基线期（前10-15个循环）
表现：荧光信号强度很低，接近背景噪音，曲线基本呈水平直线。
原理：初始循环中，DNA模板量极少，扩增产物还未达到荧光信号的检测阈值；同时，Taq酶的活性尚未完全激活，扩增效率较低。此时的荧光信号主要来自反应体系中的背景荧光（如引物二聚体的非特异性荧光、试剂本底荧光）。
2. 指数增长期（对数期）
表现：荧光信号呈指数级上升，曲线陡峭。
原理：这一阶段中，DNA模板经过数轮扩增后数量显著增加，且反应体系中的引物、dNTP、Taq酶等试剂充足，没有明显的抑制因素，扩增效率接近100%（即每个循环中，所有模板都能被复制）。此时，荧光信号的增长与PCR扩增曲线产物的指数增长完全同步，是定量分析的关键阶段——通过标准曲线法，可根据样品进入指数期的循环数（Ct值）计算初始模板的浓度。
3. 线性增长期（平台前期）
表现：荧光信号的增长速度放缓，PCR扩增曲线曲线斜率逐渐减小。
原理：随着循环次数增加，反应体系中的关键试剂（如引物、dNTP）被大量消耗，Taq酶的活性也因长时间高温循环而下降，同时扩增产物的积累会产生空间位阻抑制，导致扩增效率逐渐降低，产物的增长从指数级过渡为线性增长。
4. 平台期
表现：荧光信号不再增长，PCR扩增曲线曲线趋于水平。
原理：此时反应体系中的引物、dNTP已基本耗尽，Taq酶完全失活，DNA扩增反应无法继续进行，产物量达到*大值（平台值）。不同样品的平台值可能因初始模板量、反应体系效率等因素略有差异，但通常不再用于定量分析。
关键点
指数期是关键：只有在此阶段进行定量，结果才准确可靠。
Ct值是核心：用于计算起始模板的相对或绝对量。
曲线形态反映效率：平滑S型曲线说明反应高效特异；异常PCR扩增曲线曲线可能提示问题。
