在免疫组化染色过程中，理想的阳性信号应与组织细胞的真实形态一致、定位明确。然而由于多步骤操作的影响，常出现与组织形态不符的异常染色，统称为“形态问题”或“杂音染色”。这些问题会干扰病理医生对结果的判读，影响诊断准确性。

这是形态破坏的高发阶段，每一步操作都可能影响细胞和组织的完整性：

取材不当：取材时器械不够锋利，拉扯、挤压组织，会直接导致细胞破裂、形态变形；取材过厚，固定液无法快速渗透到组织内部，中心部位的细胞会出现自溶。

固定不及时/固定液选择错误：样本离体后如果没有立刻放入固定液，细胞内的酶会快速分解自身结构，引发自溶；固定液的种类、浓度、pH值不合适，比如用低浓度甲醛固定，会导致细胞肿胀，而甲醇固定过度则会让细胞过度收缩。

脱水透明不彻底/过度：脱水时酒精梯度不合适，比如直接从低浓度跳到高浓度，细胞会因渗透压骤变而破裂；透明时间过长，组织会变脆，后续切片时容易碎裂。

这一步的机械操作对形态的影响直接且明显：

切片质量差：切片机刀片不够锋利，或者切片时厚度不均匀、速度过快，会导致组织出现褶皱、断裂，细胞被挤压变形。

贴片不规范：贴片时水温过高，会让细胞过度膨胀；水温过低，组织片无法完全展开，出现卷曲；如果玻片清洁不到位，组织片会在染色过程中脱落，形态自然被破坏。

染色过程中的化学和物理刺激也可能损伤形态：

抗原修复不当：热修复时温度过高、时间过长，或者修复液的pH值不合适，会让细胞的蛋白质变性过度，细胞膜破裂，细胞形态塌陷；酶修复时酶的浓度过高、消化时间太长，会直接消化掉细胞的部分结构。

试剂作用过度：抗体孵育时间过长、浓度过高，会导致非特异性染色，同时也可能对细胞结构造成损伤；显色剂作用时间太久，会让显色产物过度沉积，掩盖细胞形态，甚至破坏细胞膜。

冲洗操作粗暴：冲洗时水流过大、冲击力太强，会把细胞从玻片上冲掉，或者让细胞形态被冲散。

这一步的失误会导致形态的后期破坏：

封片操作不当：封片时滴加的封胶量过多或过少，会产生气泡，气泡压迫细胞会导致形态变形；盖玻片放下时速度过快，会挤压组织，造成细胞破裂。

保存条件不佳：封片后的样本如果放在温度过高、湿度太大或者有阳光直射的环境中，封胶会老化、开裂，细胞组织会脱水变形，甚至发霉变质。