然制备诱导性多能干细胞（iPSC）的核心步骤包括：获取体细胞、重编程诱导、筛选鉴定和建立细胞库。以下是关键流程：
一、体细胞获取与处理
来源：通常取自皮肤成纤维细胞或血液细胞，需通过伦理审批。
扩增：体外培养至足够数量，检测细胞活力（如台盼蓝染色）和无菌性。
二、重编程诱导
因子选择：常用Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc，可通过病毒载体（如慢病毒）或化学小分子转染。
培养条件：在无血清培养基中培养，控制低氧、高糖环境，促进iPSC克隆形成。
三、筛选与鉴定
形态学筛选：观察克隆形态（如圆形、边界清晰）。
多能性检测：通过免疫荧光检测Nanog、Oct4等标志物，或进行胚胎样球体形成实验（EB实验）。
四、细胞库建立
母细胞库（MCB）：验证三胚层分化能力、遗传稳定性（如染色体核型分析）。
工作细胞库（WCB）：从MCB扩增，检测多能性和遗传稳定性。
