一、灵敏度验证
定义：检测到的*低目标核酸浓度（如拷贝数/mL）。
验证方法：
用标准品梯度稀释，qPCR中Ct值<40视为阳性。
支原体PCR检测灵敏度需达10 CFU/mL。
二、特异性验证
定义：仅识别目标序列的能力。
验证方法：
用同源序列DNA、近缘物种DNA扩增，观察非特异性产物。
探针法（如TaqMan）比常规PCR更特异。
结核分枝杆菌检测试剂盒需验证IS6110靶基因的特异性。
三、重复性与再现性
定义：相同条件下结果的一致性（重复性）和不同批次/操作者间结果的一致性（再现性）。
验证方法：
用变异系数（CV）评估，CV<5%为理想范围。
批内CV≤5%，批间CV≤10%。
不同操作者、多台仪器测试，弱阳性样本CT值变异系数≤3%。
四、线性范围与动态范围
定义：扩增效率保持一致的浓度区间（线性范围）和可检测的*低到*高浓度范围（动态范围）。
验证方法：
标准品线性要求|r|≥0.980，样本线性也需满足|r|≥0.980。
动态范围通常可达6–7个数量级（如10^1–10^7 copies/mL）。
五、准确度评估
定义：检测结果与真实值的一致性。
验证方法：
回收试验或比对试验，回收率一般要求在100±5%以内。
使用被评估PCR检测试剂盒和认可的标准方法同时对样本进行测定，相关系数应在0.9-1.0之间。
六、干扰物试验
定义：评估试剂盒对干扰物的耐受程度。
验证方法：
加入不同量干扰物并比较测定结果，了解干扰程度。
商品试剂盒应标明干扰物种类及干扰程度。
七、稳定性与运输贮存
定义：PCR检测试剂盒在储存和运输条件下的性能保持能力。
验证方法：
有效期一般为6个月，核酸扩增部分试剂需贮存于-20℃，产物检测部分需贮存于2-8℃。
开盖后常温放置48小时性能差异需≤±10%，经历3次冻融循环后扩增效率变化不超过5%。
八、污染防控
定义：防止外源性DNA或RNA污染的能力。
验证方法：
阴性对照在96孔板连续检测中不得出现阳性信号。
自动分液系统携带污染率需<0.1%。
总结：通过验证灵敏度、特异性、重复性、线性范围、准确度、干扰物耐受性、稳定性和污染防控，可以全面评估PCR检测试剂盒的质量。选择时，建议优先考虑符合行业标准、有明确验证数据的试剂盒。
