预防脂蛋白沉淀需从血清采购、储存、处理到使用全流程控制,以下是关键措施:
1. 严格筛选血清质量
选择正规供应商:优先采购经过脂蛋白稳定性检测的血清,要求提供批次质检报告(如脂蛋白浓度、低温沉淀率等指标)。
优先低脂质批次:根据实验需求选择脂蛋白含量较低的血清(如部分品牌的“超低脂质血清”),尤其适用于对脂质敏感的细胞培养。
2. 优化储存与运输条件
避免反复冻融:血清到货后立即分装(建议10-50 mL/管),-20℃冻存,单次使用一管,减少冻融次数。
控制储存温度:长期储存于-20℃(避免-80℃超低温导致脂蛋白不可逆变性),短期(1周内)可4℃冷藏,但需密切观察是否有沉淀析出。
运输过程保温:运输时使用干冰或冰袋维持低温,避免温度波动(尤其是夏季高温环境)。

3. 规范血清解冻与处理
缓慢解冻:从-20℃取出后,4℃冰箱过夜解冻(或25℃水浴中轻轻晃动加速解冻,避免温度超过37℃),全程禁止剧烈震荡。
温和混匀:解冻后沿管壁缓慢颠倒混匀,避免产生气泡(气泡破裂时的表面张力可能破坏脂蛋白结构)。
离心澄清:若解冻后有轻微浑浊,可2000×g离心5-10分钟,取上清使用(沉淀多为脂蛋白聚集体,离心不影响活性)。
4. 控制使用过程中的环境因素
pH值稳定:复溶血清或配制培养基时,确保pH值维持在7.2-7.4(可通过HEPES缓冲液调节),避免酸性或碱性条件。
避免高盐环境:培养基中NaCl浓度控制在0.15 mol/L左右,避免额外添加高浓度盐溶液直接混合血清。
缩短室温暴露时间:血清解冻后尽快使用,避免在室温下放置超过2小时。
5. 生产工艺与质量监控
采购前验证:要求供应商提供血清生产过程中的脂质稳定性数据(如-20℃冻存6个月后的沉淀率)。
批次测试:新批次血清使用前,取少量样品4℃静置7天,观察是否出现沉淀,筛选稳定批次长期使用。
避免过度灭活:若实验无需热灭活(如干细胞培养),可省略56℃灭活步骤,减少脂蛋白热变性风险。

