一、手工洗刷法与自动化洗板机操作误差
手工洗刷法
冲洗不彻底：残留未结合物质导致背景信号升高。
过度冲洗：可能洗脱结合复合物，降低检测灵敏度。
ELISA试剂操作差异：不同人员加样速度、力度不一致，引入人为误差。
自动化洗板机
设备校准不足：注液量或吸弃压力偏差影响重复性。
边缘效应：微孔板边缘孔位受热不均，导致信号差异。
二、抗原抗体工作浓度确定误差
浓度优化不当：未通过棋盘滴定法确定*佳比例，可能因抗体过量（钩状效应）或不足（信号弱）导致假阴性/假阳性。
批间差异：不同批次抗体纯度或活性变化，影响结合效率。
三、其他关键误差来源
样本因素：溶血、细菌污染或类风湿因子干扰。
ELISA试剂问题：混用不同厂家试剂、过期或劣质试剂盒。
环境控制：孵育温度波动、显色时间偏差。
建议：定期校准设备、规范操作流程，并通过预实验优化抗原抗体浓度。ELISA试剂实验常见误差来源及控制方法（续）
四、环境因素对检测结果的影响
温度波动：孵育箱温度不均会导致边缘孔与中心孔反应速率差异。建议使用带风扇循环的恒温箱，并在板架外加装隔热罩。
湿度控制：干燥环境易引起微孔边缘液体蒸发，造成孔间浓度梯度。可在孵育箱内放置饱和盐水维持70%湿度。
