小鼠原代破骨细胞主要来源于骨髓单核细胞（BMMs），其分化依赖成骨细胞/基质细胞分泌的M-CSF和RANKL信号通路。与RAW264.7细胞系相比，BMMs更贴近体内破骨细胞功能，但无法传代且需严格维持培养条件。
试剂：胎牛血清（FBS）、α-MEM培养基、M-CSF（20-30 ng/mL）、RANKL（50 ng/mL）、红细胞裂解液、TRAP染液
耗材：注射器、细胞筛（70-100 μm）、培养皿、骨片或羟基磷灰石涂层
器械：超净台、离心机、倒置显微镜
骨髓细胞提取
6-8周龄小鼠CO₂处死后，75%酒精消毒5分钟，无菌分离股骨/胫骨。
剪除骨骺端，用注射器冲洗骨髓腔至骨变白，收集悬液过筛离心（1000 rpm，5分钟）。
红细胞裂解液处理5分钟，PBS洗涤后重悬。
贴壁筛选
细胞接种于含M-CSF的α-MEM培养基，37℃培养24小时去除未贴壁细胞。
诱导分化
换为含RANKL的培养基，培养5-7天形成多核破骨细胞，隔天换液。
TRAP染色：阳性多核巨细胞（≥3核）为成熟破骨细胞。
骨吸收功能：在骨片上培养后可见陷窝形成。
避免机械损伤（如离心力过大或剧烈吹打）。
细胞因子需现配现用，不可反复冻融。
诱导效率需通过空白对照验证（TRAP阳性率>80%）。
五、应用场景
骨质疏松药物筛选、骨重塑机制研究。
