一、关键程序参数的影响
洗涤次数
增加洗涤次数（如从3次提升至5次）可降低背景信号，但过度洗涤（>6次）可能导致目标抗原/抗体被洗脱，降低检测灵敏度
改进洗板法（洗板机4次+纯净水冲淋2次）可减少假阳性率，适用于弱阳性样本检测
洗涤量控制
推荐洗涤量≥350μl/孔（覆盖孔壁），96孔板*大耐受量可达1ml（需同步开启吸液功能防溢出）
洗涤量不足（<300μl）会导致残留物增加，背景值升高
浸泡时间
手工洗板建议浸泡60秒，洗板机可缩短至20秒（需配合吸液时间0.8秒）
无浸泡程序时需增加洗涤次数（如8次）补偿
吸液高度
吸液高度
吸针距孔底2mm为*佳，过高（>3mm）导致残留量增加，过低（接触孔底）降低吸液效率
压力与转速
立式洗板机压力建议2.2cm，脱水转速2500rpm±10%可平衡残留与样本损失
温度控制
未校准的洗板机可能因温度波动（>25℃）导致酶标抗体失活，需定期验证
三、优化建议
三、优化建议
验证方法：通过平行检测弱阳性样本（如HBsAg或HCV抗体），比较不同参数下的OD值变异系数（CV<5%为合格）
洗板机需每月执行自检程序，重点验证吸液精度（误差<5μl）和温度稳定性
不同品牌洗板机参数需独立优化，例如进口设备可能默认吸液时间更长（1.2秒 vs 国产0.8秒）
洗涤缓冲液需脱气处理，避免气泡干扰吸液。
通过系统校准和程序优化，洗板机可显著提升ELISA检测的批内/批间一致性（CV<10%）。
