ELISA试剂盒细胞样本的制备是一项需要严谨操作的关键步骤,其质量直接影响实验结果的准确性和可靠性。首先,需根据实验设计选择适当的细胞类型和培养条件,确保细胞处于*佳生长状态。以下是ELISA试剂盒中不同类型细胞样本的标准化制备方法,综合多来源可靠操作指南整理:
🧫 一、细胞培养上清液
收集上清:移取培养基至离心管,避免吸入细胞碎片。
离心:4℃、1,500 rpm离心10分钟,沉淀杂质。
离心:4℃、1,500 rpm离心10分钟,沉淀杂质。
分装保存:立即吸取上清分装至无菌冻存管,-80℃冷冻,避免反复冻融。
分装保存:立即吸取上清分装至无菌冻存管,-80℃冷冻,避免反复冻融。
🧬 二、细胞裂解物(提取物)
清洗细胞:弃培养基,用预冷PBS轻柔洗涤细胞1次(冰上操作)。
裂解细胞:每100 mm培养皿加入0.5 ml预冷裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),刮取细胞转移至离心管。
裂解细胞:每100 mm培养皿加入0.5 ml预冷裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),刮取细胞转移至离心管。
冰浴与离心:涡旋混匀后冰上孵育15-30分钟;4℃、13,000 rpm离心10分钟沉淀碎片。
保存:取上清(可溶性蛋白)分装,-80℃保存,避免冻融。
保存:取上清(可溶性蛋白)分装,-80℃保存,避免冻融。

🔁 三、条件培养基
更换无血清培养基:细胞达适宜融合度后,用温PBS清洗2次,替换为无血清培养基。
孵育收集:37℃孵育24-48小时,移取培养基至离心管。
孵育收集:37℃孵育24-48小时,移取培养基至离心管。
离心与保存:4℃、1,500 rpm离心10分钟,分装上清于-80℃保存。
防降解:全程冰上操作,使用预冷试剂与离心管。
防降解:全程冰上操作,使用预冷试剂与离心管。
防污染:无菌分装,避免细菌或细胞碎片残留。
冻存规范:分装体积≤200 μl,-80℃保存≤6个月;冻融≤2次。
干扰物控制:避免使用含NaN₃的缓冲液(抑制HRP活性)。
不同试剂盒要求的裂解缓冲液成分可能不同,需参照说明书调整。
若样本含脂质或沉淀,需二次离心(10,000×g, 15分钟)或过滤处理。
以上步骤提供了ELISA试剂盒细胞样本的基本准备方法。在实际操作中,应根据具体的实验要求和样本类型进行调整。同时,需要注意的是,不能检测含NaN3的样品,因为NaN3会抑制辣根过氧化物酶(HRP)的活性