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ELISA实验检测的抗体类型及核心原理

点击次数:19次     发布时间:2025/7/21 11:19:37

     ELISA(酶联免疫吸附试验)检测的抗体是体液中与特定抗原结合的特异性抗体,其核心原理基于抗原-抗体的特异性结合反应。实验中,固相载体(如微孔板)预先包被目标抗原,加入待测样本(如血清、体液)后,若样本中存在对应抗体,会与抗原形成复合物;再通过酶标记的二抗与复合物结合,*终利用底物显色反应的强度定量抗体浓度。
ELISA实验检测的抗体类型取决于具体的实验设计和检测目标。在免疫学检测中,通常涉及以下两类抗体:
 
1. 一抗(Primary Antibody):直接与目标抗原(如病毒蛋白、激素、细胞因子等)结合的抗体。它可以是单克隆抗体(特异性高,针对单一表位)或多克隆抗体(识别多个表位,灵敏度较高)。例如,在检测新冠病毒抗体的ELISA中,一抗可能是针对病毒刺突蛋白(S蛋白)或核衣壳蛋白(N蛋白)的特异性抗体。
 
2. 二抗(Secondary Antibody):与一抗结合的抗体,通常带有酶标记(如HRP或ALP),用于信号放大和检测。二抗针对一抗的物种来源设计,例如,若一抗来自小鼠,二抗则为抗小鼠IgG的酶标抗体。
 
此外,ELISA还能检测样本中的游离抗体(如血清中的IgG/IgM)。例如,间接ELISA通过包被抗原捕获样本中的抗体,再用酶标二抗(如抗人IgG)进行检测,常用于感染性疾病(如HIV、乙肝)的抗体筛查。
 
不同ELISA类型的抗体应用:
- 夹心ELISA:需要配对的一抗(捕获抗体和检测抗体)识别抗原不同表位。
- 竞争ELISA:样本抗体与标记抗体竞争结合抗原,常用于小分子检测(如激素)。
 
因此,ELISA中的抗体选择需结合实验目的,确保特异性和灵敏度,避免交叉反应。

ELISA检测的抗体应用场景
 
科研领域
实验动物抗体水平监测,评估免疫接种效果。
新药研发中,用于药效学和毒性学研究,分析药物对免疫系统的影响。

确保检测准确性的核心注意事项
样本处理
 
避免溶血、脂血样本,血清需56℃灭活30分钟以消除补体干扰。
严格控制储存条件,防止反复冻融导致抗体失活。
实验操作
 
使用预包被、预封闭微孔板,减少手工操作误差。
洗涤步骤需充分(如浸泡≥30秒),避免游离抗体残留导致背景值升高。
结果解读
 
结合临床症状和其他检测(如PCR核酸检测)综合判断,避免仅凭ELISA结果确诊。
通过校准品和质控品监控批间差异,确保试剂稳定性(如批间差<8%)。
总结
ELISA检测的抗体是与目标抗原特异性结合的免疫球蛋白,其应用覆盖临床诊断、科研等多个领域。实验中需根据检测目标选择合适方法(如夹心法适用于大分子抗原,竞争法适用于小分子),并严格控制样本处理、操作流程及结果解读,以保证数据可靠性。
 

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