实验室培养的细胞，按照细胞类型划分，大致可分为以下三类。

       （1）贴壁细胞：细胞粘附于培养容器（例如组织培养塑料）。

       （2）悬浮细胞：所有细胞都随生长培养基悬浮生长，并不附着在培养容器上生长。

       （ 3）半贴壁细胞：一些细胞松散地粘附在培养容器上，另一些细胞可能悬浮在生长培养基中。

       细胞也可以根据其生长特性进行分类，分为有限增殖和无限增殖：

       有限增殖：仅增殖并维持有限数量的群体倍增活力。常见的例子是直接从组织中分离的原代细胞，或在一定次数的传代后停止生长（衰老）的细胞系。

       无限增殖：具有无限分裂能力的细胞（永生化）。通常通过转化产生，以获得类似癌症的表型（例如失去接触抑制、无限生长）。

细胞传代注意事项

当细胞密度达到80%-90%时，应及时进行传代。传代前需准备好预热的培养基、胰蛋白酶和PBS。操作时需注意：

1. 吸弃旧培养基时动作要轻柔，避免损伤细胞
2. PBS洗涤时要覆盖整个培养面，但不要过度冲洗
3. 胰蛋白酶消化时间需根据细胞类型调整，通常为1-3分钟
4. 终止消化时加入的完全培养基量应为消化液的2-3倍
5. 吹打细胞时要控制力度，避免产生过多气泡

冻存与复苏要点

细胞冻存建议使用专业冻存液，冻存密度控制在1×10^6/ml左右。程序性降温盒可提高冻存成功率。复苏时需注意：

- 快速解冻后立即转移至预热的完全培养基中
- 首次换液应在细胞贴壁后进行（通常4-6小时）
- 复苏后24小时内避免移动培养瓶

常见问题处理

出现污染时，应立即隔离该培养体系，并用消毒剂处理工作台。对于珍贵细胞株，可尝试抗生素处理，但成功率有限。若发现细胞状态异常，可考虑：

1. 检查培养基pH值和渗透压
2. 确认血清批次是否更换
3. 检测培养箱CO2浓度和湿度
4. 观察是否有支原体污染迹象

质量监控建议

建议定期进行以下检测：
- 细胞形态学观察（每日）
- 生长曲线绘制（传代时）
- 支原体检测（每月）
- 细胞活力检测（冻存前后）

建立完整的实验记录，包括：
✓ 细胞代数
✓ 培养基批次
✓ 操作人员
✓ 异常情况备注

良好的细胞培养习惯是实验成功的基础，需要操作者保持耐心和细致。随着实践经验的积累，您将能更好地掌握这项关键技术。