在进行贴壁细胞传代时，首先需要确保细胞的生长状态良好，没有受到污染或过度拥挤的影响。接着，使用胰蛋白酶或其他适
当的酶溶液来消化细胞间的连接，使细胞从培养皿底部脱落。消化过程需要精确控制时间，以避免对细胞造成损伤。
当细胞被成功分离后，需要通过离心等方法将它们收集起来，并重新悬浮在含有适当营养成分的培养基中。在接种到新的培养皿之前，还可以根据实验需要对细胞进行计数，以确保每个培养皿中的细胞数量适中。
值得注意的是，传代过程中使用的所有器皿和材料都需要经过严格的灭菌处理，以防止细菌、真菌或其他微生物的污染。此外，传代的频率也需要根据细胞的生长速度和实验需求来确定，以避免细胞因过度增殖而失去原有的生物学特性。
贴壁细胞传代实验注意事项：
1）培养过程中需维持细胞处于对数生长期，80%左右即可传代，传代比例请参照说明书建议；
2）消化时间不宜过长，大部分细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可中止消化，难消化的细胞可分次消化，每次时间不超过5 min；
3）培养过程中需要定期换液，一般细胞建议2-3天换液一次。
贴壁细胞传代实验准备：
将15 mL离心管、T25细胞培养瓶、PBS缓冲液、移液管、电动移液器等物品提前放入生物安全柜中，紫外照射30 min消毒灭菌；细胞完全培养基、0.25%胰酶-0.02%EDTA从4℃冰箱中取出后，复温至室温，备用。随后，戴上无菌手套，确保所有操作均在无菌条件下进行。打开生物安全柜的照明与通风系统，再次检查内部环境是否洁净，无异物。使用75%酒精棉球擦拭双手及操作台面，进一步减少污染风险。
从恒温且精确调控的培养箱中，科研人员如同对待珍稀宝藏般，小心翼翼地取出那承载着生命奥秘的待传代贴壁细胞培养瓶。他们轻轻地、几乎是不易察觉地晃动培养瓶，宛如微风拂过湖面，以此细致观察细胞内蕴藏的勃勃生机与繁衍生息的状态。这一举动，旨在确保细胞们已达到那至关重要的80%-90%的融合度——一个标志着细胞群落紧密相连、活力充沛，正是进行传代操作的黄金时刻。
科研人员利用酒精灯那跳跃不息、炽热的外焰，对移液管的口部进行了一场严谨而神圣的灭菌仪式，火焰的舔舐如同为移液管披上了一层无菌的护盾。随后，他们以一种近乎艺术的手法，精确地吸取了适量、温度适宜的PBS缓冲液，宛如细雨般轻柔地、分两次拂过细胞表面。这不仅仅是为了洗去那些可能阻碍细胞新生的残留血清与凋亡细胞，更是为了维持细胞那娇贵而敏感的湿润环境，如同为它们提供了一个继续蓬勃发展的温床。在这一过程中，每一步操作都凝聚着科研人员对生命的敬畏与对科学的严谨，共同编织着细胞传代这一生命延续的美妙篇章。
贴壁细胞传代实验步骤：
1. 将准备好的培养基等物品用酒精消毒后放入安全柜中；
2. 从培养箱中取出待处理的细胞，在显微镜下观察细胞状态；
3. 用酒精消毒培养瓶，放入安全柜中；
4. 轻轻吸去细胞上清；
5. 加入2-3 mL PBS缓冲液润洗一次，吸去上清；
6. 加入1 mL 0.25%胰酶-0.02%EDTA，轻轻晃匀、覆盖所有细胞后，置于37℃培养箱静置消化；
7. 消化1-2 min左右，在显微镜下观察细胞消化情况，每个细胞消化时间有所不同，具体以细胞消化状态为准；
7. 消化1-2 min左右，在显微镜下观察细胞消化情况，每个细胞消化时间有所不同，具体以细胞消化状态为准；
8. 消化完全后，加3 mL完全培养基终止，1200 rpm，3 min离心，去上清；
9. 加入新鲜完全培养基重悬，按比例将细胞悬液分装至培养瓶中；
9. 加入新鲜完全培养基重悬，按比例将细胞悬液分装至培养瓶中；
10. 在显微镜下观察传代后的细胞密度及状态；
11. 将培养瓶放入培养箱中培养。
11. 将培养瓶放入培养箱中培养。
弃去PBS后，立即加入预温至室温的0.25%胰酶-0.02%EDTA溶液，量以刚好覆盖细胞层为宜。轻轻摇晃培养瓶，使胰酶均匀分布，随后置于37℃培养箱中消化2-3分钟，期间可通过显微镜观察细胞形态变化，直至大部分细胞变圆并脱离瓶壁。
一旦观察到适宜的消化程度，迅速加入等体积的完全培养基终止消化。使用电动移液器轻轻吹打细胞悬液数次，确保所有细胞完全分散。之后，将细胞悬液转移至事先准备好的15 mL离心管中，配平后以1000 rpm的速度离心5分钟，以沉淀细胞。离心期间，可准备新的T25培养瓶，加入适量的完全培养基，为后续细胞接种做准备。
