血红蛋白具有类过氧化物酶活性,可催化H2O2释放新生态氧,使邻甲联苯胺氧化发生颜色变化,由无色zui终变为蓝紫色。根据显色深浅与标准进行比较,可测出其含量。在血浆游离血红蛋白测定实验中,这一化学反应是定量检测的关键步骤。当血红蛋白存在时,它如同一个微小的催化剂,促使过氧化氢(H2O2)分解,释放出活泼的氧分子。这些氧分子随即与邻甲联苯胺分子发生氧化反应,导致后者结构改变,颜色也随之逐步加深,从初始的无色状态,经过一系列中间色调,最终定格为鲜明的蓝紫色。
实验过程中,精确控制反应条件至关重要。温度、pH值以及反应时间等因素,均可影响酶活性及化学反应速率,进而影响颜色变化的程度和稳定性。因此,实验者需严格遵守操作规程,确保每一步骤都在最适条件下进行,以获得准确可靠的结果。
实验方法
材料:
1.2g/L邻甲联苯胺溶液
2.1%H2O2
3.10%醋酸溶液
4.分光光度计
方法:
1.抽取静脉血2-3ml,*抗凝,离心分离血浆。
2.按下表进行操作,用分光光度计,波长为530nm,以空白管调零,测定测定管的吸光度。
2.按下表进行操作,用分光光度计,波长为530nm,以空白管调零,测定测定管的吸光度。
此方法不仅灵敏度高,而且操作简便,是临床检验中常用的手段之一,对于诊断溶血性贫血、血管内溶血等病理状态具有重要意义,为医生的诊断与治疗提供了有力的实验室依据。