血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂。此外,对于需要长期储存的ELISA标本,尤其是那些用于科研或回顾性分析的珍贵样本,更应严格遵循高标准保存流程。除了基本的低温保存外,还可考虑使用液氮进行超低温(-196°C)冷冻,以最大限度地减缓样本中生物分子的降解速度,确保数据的长期稳定性和可靠性。
在样本标记与记录方面,每份标本都应附有详细的标签,包括采集日期、患者信息(匿名处理以保护隐私)、样本类型、处理过程及任何特殊情况说明。同时,建立电子化的样本管理系统,便于追踪样本的存储位置、检测状态及剩余量,提升管理效率。
对于ELISA实验前的样本预处理,特别是那些需要特殊处理的样本(如高黏度或含有大量颗粒物的样本),可尝试采用离心、过滤或稀释等方法,以去除杂质,减少非特异性反应,提高检测准确性。此外,对于可能含有酶抑制剂或激活剂的样本,需根据具体情况进行预处理,以消除其对ELISA反应体系的影响。
最后,无论是直接测定还是预处理后的样本,在加入ELISA反应板前都应进行充分的混匀,确保样本中各成分分布均匀,避免局部浓度过高导致的假阳性或假阴性结果。同时,严格控制实验条件,如温度、时间、pH值等,确保实验结果的准确性和可重复性。通过这些细致入微的操作,ELISA标本的采取和保存将更加科学、规范,为临床诊断和科学研究提供坚实的数据支持。