取出并丢弃废细胞培养基。
用不含钙和镁的平衡盐溶液清洗细胞,或用EDTA清洗。将洗涤液加入烧瓶与试管相对的一侧。摇动烧瓶1至2分钟,冲洗细胞板,并丢弃洗涤液。
将2-3 ml/25 cm2的所选解离溶液添加到与细胞相对的烧瓶侧。确保解离溶液覆盖在细胞膜上。在37°C下培养烧瓶。轻轻摇动烧瓶。一般情况下,细胞在5-15分钟内被解离,实际需要的时间会因细胞系的不同而有所不同。仔细监控过程以避免细胞损伤。除了轻轻摇动外,还可以敲打瓶状细胞系,这些细胞系的特征是很难从基质中移除,以加速去除。
当电池完全分离后,将烧瓶竖直放置,使电池排至烧瓶底部。向烧瓶中加入完整的培养基。用移液管在单层膜表面反复分散细胞。计数细胞并传代培养。