草鱼出血病I型病毒（GCRV I）RNA核酸检测试剂盒样品DNA的制备

1.用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。。也可以选购本公司的一管式病毒DNAOUT或其升级版柱式病毒 DNAOUT。本试剂盒免费赠送15次DNA病毒裂解液试用装(一管式病毒 DNAOUT的成分)。稀释阳性对照(以10E2-10E7这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行干万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的长为86bp的DNA段作为阳性对照。

2.标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2

3用带芯枪头分别加入45L模板稀释液(用带芯枪头,下同

4.在7号管中加入5uL1x10E8持贝L的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝L的阳性对照。放冰上待用。5.换枪

头,在6号管中加入5uL1×10E7拷贝L的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝μ的阳性对照。放冰

6换枪头,在5号管中加入5uL1×10E6拷贝L的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝L的阳性对照放冰上待用。

7换枪头,在4号管中加5uL1x10E5拷贝L的阳性对照到4号管中,得1×10E4拷贝L的阳性对照。放冰上待用

8.重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。设置qPCR反应(20L体系,在样品制备室进行

9.在PCR管中加入下列成分(待测样品需要做三次重复,下表只列出一次。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后后加)注意事项