1．   使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

 

2．   根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

 

3．   加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

 

4．   甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

 

5．   每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

 

6．   甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

 

7．   每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

 

8．   取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

 

9．   在450nm波长处测定各孔的OD值。