(1) 抗原包被：用包被液将PEDV抗原作1∶5稀释包被反应板，每孔100μl，同时设阴性细胞培养物对照孔，置4℃过夜。
(2) 洗涤：用洗涤液洗涤2次，每次2min，沥干。
(3) 加入被检血清：用保温液将被检血清作1∶100稀释，加入反应板相邻的两个孔中，每孔100μl。同时作阴、阳性标准血清对照，置37℃孵育1h。
(4) 洗涤3次：方法同上。
(5) 加入酶结合物：用保温液将酶结合物作1∶4 000稀释，加入反应孔中，每孔100μl，置37℃孵育1h。
(6) 洗涤3次：方法同上。
(7) 加入底物：每孔100μl，置室温暗盒内显色20min。
(8) 加入终止液：每孔50μl，静置5min。
(9) 测定OD值：用检测仪，于492nm波长，按仪器使用及制定标准要求调节仪器，测定各反应孔的OD值，记录结果。
1．细胞培养物上清：细胞培养物于室温1000g，离心10分钟后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。
2．血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g，4℃离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
3．血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂标本采集后30分钟内于2-8℃,1000g离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
4．尿液：无菌收集取初尿，离心除去沉淀物，即可用于检测，要长期保存尿样，可以加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿样冰冻保护液放入-20℃冰箱长期保存。
5．组织匀浆：将组织标本先用PBS洗涤，除去多余血液，匀浆化后放在PBS于-20℃放置过夜，再经过二次反复冻融破膜，5000g，4℃离心5分钟，取上清即可检测。注：取样和样品处理过程中，防止有毒物质对操作人员的危害，要采取相应的保护措施。
