末端同位素标记试剂盒产品特点:
1. 使用本试剂盒之前,不需要对 5′末端的磷酸基团进行去磷酸化处理,因为使用的kinase 能使5′末端的磷酸与[γ-32P]ATP的γ-磷酸进行交换。
2. 合成的单链或双寡核苷酸的5′末端游离的OH基团都能通过Kinase反应被标记(或者只是简单的磷酸化)。
3. 提供的两种反应液使交换反应和磷酸化反应都能高效进行,均能得到大于106 cpm/pmol(5′-end)的比活性。
注意事项:
1.缓冲液可在室温融解。融解后立即置于冰中,使用前充分混匀。
2. 5×交换反应缓冲液于-20℃冻结保存时会有白色浑浊出现,但不影响反应效果。
3.酶切得到的DNA片段需经乙醇沉淀等方法纯化。
4. 当用于交换反应的DNA在5 pmoles以上(约1,000bp以上)时,标记效率有时会低于106 cpm/pmol。
5. 如果交换反应所用 DNA低于500bp时,标记效率有时会有所降低。
6. 若不进行放射线标记,仅使用本试剂盒做5′末端磷酸化反应时,反应体系中的[γ-32P]ATP可用5μl的10mM ATP 代替。
7. 磷酸化反应时的[γ-32P]ATP可用[γ-35S]ATP 替代。