一、标准品梯度配制核心操作
前置准备
冻干标准品提前30分钟从-20℃取出，6000-10000rpm离心30秒，让管壁粉末沉底。
用人酶联免疫试剂盒配套的样本稀释液精准复溶，严禁用PBS、洗涤液替代，确保基质与待测样本匹配。
复溶后轻柔涡旋混匀，室温避光静置15-30分钟，待蛋白完全溶解后短暂离心10秒，全程冰上放置避免降解。
8点倍比梯度配制（通用方案）
标记7支1.5mL离心管为S0-S6，每管精准加入250μL样本稀释液。
取250μL*高浓度母液S7加入S6管，吹打混匀后更换新枪头，从S6取250μL加入S5管，以此类推逐级稀释，S0仅加稀释液作为零浓度空白。
以总胆固醇常见浓度范围为例，梯度可设为：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0 pg/mL。
所有梯度管需在1小时内完成加样，避免室温久放导致浓度偏差。
二、OD采集关键控制要点
仪器参数设置
主波长固定为450 nm，这是TMB酸终止后黄色产物的*强吸收波长；条件允许时叠加630 nm参考波长做双波长校正，消除板底划痕、孔壁瑕疵带来的系统误差。
人酶联免疫试剂盒标仪提前开机预热，待光源稳定后再开始读数，避免光路漂移影响结果。
读值时机与操作规范
加入终止液后15-30分钟内完成上机检测，*长不超过1小时，防止颜色衰减导致OD值偏低。
读板前确认孔内无气泡，若有气泡用细针轻轻刺破，避免气泡遮挡光路造成读数异常。
定期校准酶标仪光路、清洁比色通道，减少长期使用带来的读数漂移；若某孔OD值明显偏离复孔均值，优先回溯加样、洗板环节，不要直接剔除数据。
