样本前处理‌

组织样本：按1g组织加入5-10mL提取液的比例冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清作为粗酶液待测。

细胞/细菌样本：按500万细胞加入1mL提取液的比例，冰浴超声破碎（功率200W，超声3s间隔10s，重复30次），8000g 4℃离心10min，取上清待测。

‌试剂配制‌：将配套粉剂试剂加入对应体积的试剂一充分溶解混匀，哺乳动物样本置于37℃水浴预热5min，植物/微生物样本置于25℃水浴预热5min，工作液需现配现用。

‌上机检测‌：紫外分光光度计/酶标仪提前预热30min，调节波长至340nm并以蒸馏水调零；在比色皿/96孔板中加入样本与预热后的工作液，混匀后立即记录20s时的初始吸光度A1，以及5分20s时的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。

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活性计算‌：可根据实验需求选择三种计算方式：

按样本蛋白浓度：SD活性（nmol/min/mg prot）= 643×ΔA÷样本蛋白浓度

按样本鲜重：SD活性（nmol/min/g鲜重）= 643×ΔA÷样本质量

按细胞密度：SD活性（nmol/min/10⁴cell）= 1.286×ΔA

关键使用注意事项

全程样本处理需在冰浴环境下操作，避免SD酶蛋白失活，离心后上清液需保证澄清无杂质，否则会干扰340nm处的吸光度读数。

粉剂试剂溶解后建议分装冻存，避免反复冻融导致底物活性下降；所有液体试剂需4℃避光保存，使用前提前恢复至室温。

正式实验前建议选取2-3个预期活性差异较大的样本进行预测定，优化样本加样量，确保ΔA数值落在试剂盒的线性检测范围内。