ELISA（酶联免疫吸附测定）是定量检测人总胶原蛋白的常用技术，其结果受样本采集、试剂状态、温育时间、洗涤均匀性等多因素影响 。为获得准确、可重复的数据，需系统优化各环节。

 关键优化维度与操作建议

1. 样本采集与处理

样本质量直接影响检测准确性，应遵循以下规范：

避免溶血与污染：采血时防止严重溶血，分离过程注意无菌操作 。

抗凝剂选择：血浆样本推荐使用EDTA或肝素抗凝，30分钟内离心分离 。

保存条件：

短期（≤1周）：2–8°C保存；

长期：–70°C以下冷冻，避免反复冻融 。

解冻方式：室温缓慢解冻，确保样品充分混匀，不建议37°C加热 。

2.  ELISA（酶联免疫吸附测定）准备与环境控制

温度平衡：所有试剂和样本在使用前需恢复至室温（18–25°C），至少放置20–30分钟，以保证反应体系稳定 。

标准品配制：现用现配，每批次实验重新稀释冻干标准品，避免久存降解 。

洗涤液配置：按说明书30倍稀释浓洗涤液（如含0.05%吐温20的PBS），若有结晶可水浴加热助溶 。

3. 操作流程精细化

4. 减少干扰与提高重复性

设置对照：

空白对照：不加样本和 ELISA（酶联免疫吸附测定）酶标试剂，其他均加；

阳性对照：选用与样本基质相似的标准品或已知阳性血清 。

复孔检测：建议设双孔或三孔，降低随机误差，提升数据可信度 。

避免交叉污染：每次加样更换枪头，不同试剂使用独立容器 。

5. 数据分析与验证

标准曲线拟合：采用四参数逻辑拟合（4PL）或线性回归，R² > 0.99视为合格。

回收率测试：在样本中添加已知浓度标准品，回收率应在80%–120%之间 。

稀释线性：高浓度样本梯度稀释后检测，预期浓度与实测值偏差应在±30%以内 。