EPI肾上腺素ELISA试剂盒的操作步骤可综合不同物种（如人、大鼠、牛）的通用流程，关键步骤如下：
一、实验前准备

‌试剂回温‌：将试剂盒组分（标准品、酶标板、洗涤液等）平衡至室温（22-27℃）‌。

‌配制试剂‌：

浓缩洗涤液按1:20或1:30用蒸馏水稀释（如50ml浓缩液+950ml水）‌。

标准品梯度稀释：原液用稀释液倍比稀释至7个浓度梯度（如2560ng/mL起始）‌。

样本处理：血清/血浆需离心（4000rpm，20min），组织匀浆需PBS研磨后离心取上清‌。

‌加样‌：

酶标板中分别加入标准品（50μL/孔）、样本（40μL稀释液+10μL样本）‌。

阴性对照孔仅加稀释液，避免交叉污染需更换枪头‌。

‌孵育‌：

37℃避光孵育30-90分钟（竞争法）或60分钟（夹心法）‌。

‌洗涤‌：

手工洗板：每孔加350μL洗涤液，浸泡30秒后拍干，重复3-5次‌。

自动洗板机需增加30秒浸泡步骤以提高精度‌。

‌加酶标抗体‌：每孔加入50-100μL HRP标记抗体，37℃孵育30分钟‌。

‌显色反应‌：

加入TMB底物液（100μL/孔），避光孵育10-20分钟‌。

显色后立即加终止液（50μL/孔），蓝色变黄色‌。

‌读数‌：450nm波长测OD值，15分钟内完成‌。

以标准品浓度（横坐标）和OD值（纵坐标）绘制标准曲线，样本浓度通过曲线方程计算‌。

若样本OD值超出标准范围，需稀释后复测‌。

‌安全防护‌：底物液和终止液具腐蚀性，需戴手套操作‌。

‌试剂保存‌：未用完板条需密封干燥保存，避免反复冻融样本‌。

‌质量控制‌：每批次实验需复孔检测，确保CV值<10%‌。

不同试剂盒可能存在细节差异，需以具体说明书为准‌。