ELISA试剂盒铺板是实验成功的关键步骤之一，操作不当可能导致背景值升高、重复性差甚至假阳性结果。为确保实验数据的可靠性，以下几点技巧值得注意：
一、实验前准备
试剂平衡
所有试剂（包括标准品、样本）需提前1小时置于室温平衡，冻存样本应在2-8℃缓慢解冻
浓缩洗涤液需按说明书比例稀释（如30倍浓缩液稀释至600mL）
耗材选择
使用多道移液器（如8/12通道）提高加样一致性，避免单孔操作误差
枪头需悬空加样（距孔底1-2mm），防止接触孔壁导致残留
二、铺板操作要点
孔板布局
标准品建议设置5个浓度梯度，每个浓度做双平行孔（共10孔）
空白孔（仅加稀释液）和样本孔需预留足够数量，避免交叉污染
加样技巧
标准品与样本加样需在15分钟内完成，防止蒸发影响浓度
不同样本/标准品间必须更换枪头，避免交叉污染
加样后立即覆盖封板膜，37℃孵育30分钟（误差控制在±5分钟内）
三、关键注意事项
洗板优化
优先使用洗板机（背景信号降低30%以上），手动洗板需执行"三洗三吸"流程
每次洗板后增加30秒浸润时间，提升洗涤效果
孵育控制
多板操作时禁止叠放，需平铺于恒温箱内确保温度均匀
显色反应需避光进行，终止后15分钟内完成读数
四、常见问题处理
高背景信号：检查洗板是否彻底，或增加阻断步骤（如5% BSA封闭）
标准曲线异常：确认标准品分装是否避免反复冻融，稀释时充分混匀
