在细胞冷冻保存过程中，细胞浓度的控制不仅关系到复苏后的存活率，还与后续实验的稳定性和重复性密切相关。细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内的细胞浓度需要控制在适当的范围内，以确保细胞在冷冻和复苏过程中的存活率和活性。不同类型的细胞可能需要不同的浓度，但通常有一些通用的指导原则：
一般细胞：冷冻管内细胞数目一般为 1 × 10⁶ cells/ml/vial。这个浓度适用于大多数常规细胞系，可以确保在冷冻过程中细胞不会因为浓度过低而失去活性，也不会因为浓度过高而导致细胞聚集或在解冻后死亡。
融合瘤细胞（Hybridoma）：对于融合瘤细胞，推荐的细胞浓度更高，一般为 5 × 10⁶ cells/ml/vial。这是因为融合瘤细胞在冷冻过程中更容易受损，较高的细胞浓度有助于提高复苏时的存活率。
人成纤维细胞（Normal Human Fibroblast）：推荐的细胞浓度范围为 1 × 10⁶ 至 3 × 10⁶ cells/ml。
其他细胞类型：某些特殊类型的细胞可能需要不同的浓度。例如，一些白血病细胞株可能对二甲基亚砜（DMSO）敏感，可以使用 10% 甘油 替代 DMSO，并调整细胞浓度。
注意事项：
细胞状态：冷冻前的细胞应处于良好的生长状态（对数生长期），存活率应达到 80–90%，并且没有污染。
冷冻保护剂：常用的冷冻保护剂是 5–10% DMSO 或 10% 甘油，这些试剂可以减少细胞内冰晶的形成，从而降低冷冻损伤。
冻存液配制：为了减少 DMSO 在加入过程中释放的热量对细胞的损伤，通常会先配制双倍浓度的冻存液，再与细胞悬液等量混合。
综上所述，细胞冷冻保存时，细胞冷冻管内的细胞浓度应根据细胞类型和实验需求进行调整，一般推荐的浓度范围为 1 × 10⁶ 至 5 × 10⁶ cells/ml/vial。
