外泌体提取纯化试剂盒（细胞上清）的应用正日益广泛，为科研工作者提供了高效、便捷的解决方案。随着研究的深入，外泌体在疾病诊断、药物递送和细胞间通讯等领域的潜力逐渐显现。
操作规程

 

一、样品预处理

 

1，取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后 于 25℃水浴中进行解冻，将完全融化后的样品置 于冰上；如果是新鲜样品，收集样品后置于冰上；

 

2，样品初始用量：（单次提取时的样品量）

 

样品名称 * 低 量

 

细胞培养上清液 20 mL

 

3，离心去细胞碎片：将样品转移至离心管 中，于 4℃以 3000 g 离心 10 min，去除样品中 的细胞碎片；（注：若沉淀较多，可 3000g/10min 离心多次至无明显沉淀，每次取离心上清液）

 

4，上清液转移：去除细胞碎片的离心上清 液转移到新的 50mL 离心管中； 

 

二、提取外泌体

 

1，上清液预处理：在去除杂质的离心上清 液中加入 Exosome Concentration Solution （ECS 试剂），具体的加入剂量如下：（其他剂量 请根据表中的试剂用量等比例换算） 样品名称 样品剂量 加入 ECS 剂量

 

细胞培养上清液 20 mL 5 mL

 

2，溶液混合：加入 ECS 试剂后将离心管盖 紧，通过涡旋振荡器混匀 1 min，再放置于 4℃ 静置至少 2 h；（增加静置时间可提高外泌体得率， 但静置时间不可超过 24h）

 

3，沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管 于 4℃以 10000 g 离心 60 min，弃上清，沉淀 中富含外泌体颗粒；（注：尽可能吸净上清液）

 

4，外泌体重悬：取 1×PBS 均匀吹打离心沉 淀物（具体加入剂量如下表），待其溶解后，将 重悬液转移至新的 1.5 mL 离心管中；

 

细胞上清样品体积 加入 PBS 剂量

 

20 mL 0.2 mL

 

注：其他剂量请根据表中的试剂用量等比例换算

 

5，收获外泌体颗粒：将含有重悬液的 1.5 mL离心管于 4℃以 12000 g 离心 2 min，保留上清 液，该上清液中富含外泌体颗粒。（注：若沉淀 较多，可 12000 g /2min 离心多次至无明显沉 淀，每次取离心上清液）

 

三、纯化外泌体

 

1， 纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗品 转入 Exosome Purification Filter（EPF 柱）上 室中，于 4℃以 3000 g 离心 10 min，离心后收 集 EPF 柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌 体颗粒；（注：EPF 柱不可重复使用）

 

2，外泌体的保存： 纯化后的外泌 体以 50-100 μL 进行分装保存于-80℃低温冰箱中， 以备后继实验使用。

 

四、储存条件 本品在室温可稳定保存 24 个月，使用前请充 分混匀。

 

五、注意 本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学 诊断及其他用途！