细胞培养是一项精细的技术工作，它涉及到多种因素的控制和管理。在细胞培养过程中，研究人员可能会遇到一系列的问题，这些问题可能会影响细胞的生长状态和实验结果的准确性。以下是细胞培养中一些常见问题的原因及对策。
1. 微生物污染
原因：
细菌污染：细菌可以通过空气、实验室器皿或操作中的不洁净传播到培养基中，迅速繁殖并导致培养基浑浊。
真菌污染：真菌污染是细胞培养过程中*常见的一种，尤其在梅雨季节进行细胞培养更易污染。
支原体污染：支原体是一种大小介于细菌和病毒之间，*小直径0.2μm并独立生活的微生物1。
对策：
严格无菌操作：确保在无菌条件下操作，包括使用无菌技术和器具，并在生物安全柜中进行操作。
定期更换培养基：避免使用过期的培养基，定期更换新鲜的培养基可以减少微生物的污染。
使用抗生素和抗真菌剂：在培养基中添加一定量的抗生素和两性霉素（青+链=双抗，青+链+两=三抗），防止微生物的污染1。
2. 细胞生长缓慢或死亡
原因：
制备单细胞悬液时细胞活率和得率较低，导致初始活细胞较少。
培养基不合适，更换成熟的培养基，一些细胞的培养还会添加适量血清。
培养条件不当，如温度、CO2浓度、湿度等参数不正确1。
对策：
选择合适的单细胞悬液制备仪，确保制备的单细胞悬液得率和活率都在较高水平。
更换成熟的培养基，并根据需要添加适量血清。
调整到*佳的培养条件，例如37±0.5℃（一些昆虫可能在25-28℃），pH值7.2~7.4；使用二氧化碳培养箱等设备维持适当的气体环境1。
3. 培养基变浑浊
原因：
微生物污染：这是导致培养基变浑浊的*常见原因之一。
细胞状态变化：如果细胞死亡并释放出细胞碎片或蛋白质，这些物质可能会使培养基变浑浊。
化学成分沉淀：培养基中的某些成分可能发生沉淀，导致培养基浑浊4。
对策：
保持严格的无菌技术，定期检查细胞的状态。
检查细胞状态，定期观察和检查细胞的形态和健康状况，确保它们在培养中保持活跃和正常。
控制培养条件，严格控制培养箱的温度、湿度和CO2浓度等参数4。
4. 细胞解冻或传代后附着力偏低
原因：
湿度过低致使培养容器上集聚静电所致。
对策：
适当增加房间湿度，使用防静电装置或者用消毒过的湿毛巾擦拭培养容器外侧，来减低静电产生2。
5. 细胞老化
原因：
细胞的传代次数太多，细胞已经老化。
对策：
获得一个新的、亚培养次数较少的细胞储存液很有必要3。
通过上述措施，可以有效地解决细胞培养过程中遇到的一些常见问题，保证细胞培养的成功率和实验结果的准确性。
