准备电泳和转膜所需的设备和试剂。

根据实验需求，将蛋白 Marker 与样品一起进行电泳。

在电泳过程中，观察蛋白 Marker 的迁移情况，判断电泳是否正常进行。

电泳结束后，进行转膜操作，并通过蛋白 Marker 评估转膜效果。电泳结束后，小心取出凝胶，置于转膜缓冲液中平衡5分钟。将PVDF膜预先用甲醇激活30秒，再放入转膜缓冲液中浸泡。按照"三明治"结构依次放置转膜夹板、滤纸、凝胶、PVDF膜和滤纸，注意排除气泡。转膜条件建议设置为100V恒压，冰浴条件下转膜1小时。

转膜完成后，取出PVDF膜进行染色观察。彩色预染蛋白Marker的优势在此刻显现：无需额外染色步骤，即可直接观察到清晰的条带分布。通过比较Marker条带的迁移位置，可以准确判断目标蛋白的分子量范围。若发现条带扩散或模糊，可能是转膜时间不足或电流不稳定导致，需要优化转膜参数。

对于Western blot实验，建议在转膜后立即进行封闭步骤。使用5%脱脂牛奶或BSA室温封闭1小时，可有效减少非特异性结合。此时Marker的彩色条带仍清晰可见，为后续抗体孵育和显色提供可靠的分子量参照。值得注意的是，不同批次Marker的染色效果可能存在细微差异，建议每次实验都设立完整的Marker对照。

实验结束后，可将PVDF膜晾干保存。彩色预染Marker的稳定性使其在干燥后仍能保持条带清晰，方便后续结果分析和数据保存。这种直观的分子量标记方式，大大简化了实验流程，特别适合需要快速判断蛋白大小的研究场景。
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