一般来说，不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。然而在一些特殊的实验里，如双标实验里，如果其中一个一抗是山羊来源的，一个是小鼠来源的，则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的二抗，这时候，二抗就不能选择山羊或者小鼠来源的。有相应的驴来源的二抗，非常适合做类似双标的免疫实验。

一抗

 

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：

 

分析试验应用的类型 l 样本蛋白的结构性质 l 样本的种属 l 抗体宿主的种类 l 抗体的标记和检测

 

1.分析试验应用的类型

 

一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。

 

了解样本蛋白的结构性质有助于选择*合适的抗体，至少两方面因素需要考虑待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。

 

如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。

 

l 样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来。

3.样本的物种

 

应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy和 NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。在双标实验中，二抗的选择尤为关键。除了种属来源的匹配性外，还需考虑二抗的标记方式是否兼容实验需求。例如，若使用荧光标记的二抗，需确保两种荧光素的发射光谱无重叠，避免信号干扰。常见的搭配如Alexa Fluor 488与Cy3，或Alexa Fluor 647与Cy5，其激发和发射波长差异显著，能有效区分不同靶点的定位。此外，二抗的效价和稀释比例也需优化，过高浓度可能导致非特异性结合，而过低则影响信号强度。

 

对于特殊样本（如磷酸化蛋白检测），还需注意二抗的交叉反应性。某些二抗可能对磷酸化修饰敏感，导致假阳性结果。此时，可选择经磷酸化特异性验证的二抗，或在实验前用非磷酸化蛋白预吸附二抗，以排除干扰。若样本来源于稀有物种，且缺乏商业化抗体，可考虑使用多克隆抗体，因其识别表位更广泛，可能覆盖目标蛋白的保守区域。

 

抗体的保存条件同样影响实验结果。反复冻融会降低抗体活性，建议分装保存于-20℃或-80℃。标记二抗需避光保存，尤其是荧光标记物，长期暴露于光线下易淬灭。每次实验前，应通过阳性对照验证抗体性能，例如用已知表达靶蛋白的细胞系或组织切片，确保检测系统的可靠性。

 

*后，实验设计需预留调整空间。若初次结果不理想，可尝试更换抗体克隆号、调整抗原修复条件（如柠檬酸钠缓冲液pH值）或优化封闭剂（如BSA与血清的比例）。通过系统性验证，才能确保抗体的特异性和灵敏度满足研究需求。