Bcl-2的表达随着LPS作用时间的延长而明显下降,与TUNEL染色的相关分析表明,Bcl-2的表达与细胞凋亡有显著的负相关.进一步的研究发现，为了深入探究Bcl-2在HFLS-RA细胞凋亡过程中的具体作用机制，我们采用了Western Blotting技术对Bcl-2蛋白水平进行了定量分析。结果显示，随着LPS刺激时间的增加，Bcl-2蛋白条带的灰度值逐渐降低，这与免疫组化结果一致，再次确认了Bcl-2表达下调与细胞凋亡进程的正相关性。
我们还检测了与凋亡相关的其他关键蛋白，如Bax和Caspase-3的活性变化。结果显示，Bax蛋白表达量随LPS作用时间延长而显著上升，而Caspase-3的酶活性也呈现逐渐增强的趋势，提示这些蛋白可能共同参与了LPS诱导的HFLS-RA细胞凋亡过程。
为了进一步验证Bcl-2的功能，我们利用siRNA技术特异性敲低了HFLS-RA细胞中的Bcl-2基因表达。结果显示，敲低Bcl-2后，即使在无LPS刺激的情况下，细胞凋亡率也显著增加，TUNEL阳性细胞数量明显增多，表明Bcl-2确实在维持HFLS-RA细胞存活中发挥着重要作用。
HFLS-RA细胞 人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞用免疫组化的方法检测了Bcl-2的表达.
细胞常规培养传代流程（ 请严格遵照无菌操作）
1． 吸出原培养瓶中的培养基，PBS 缓冲液润洗细胞两次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在 1-2min）
2． 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰_酶，加 6~8ml 培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。
3． 取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。
4． 注意培养基 PH 值变化情况，定期换液（每周 2-3 次），待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或冻存。
结果随LPS作用时间的延长,脾损伤逐渐加重.HE染色中,生发中心和动脉周围淋巴鞘分别在LPS注射后9小时和18小时出现大量深浅不一的颗粒状细胞碎片.
TUNEL阳性染色细胞随时间延长而增多.电镜下可见到凋亡的淋巴细胞.在18小时还见到细胞坏死现象.
综上所述，本研究不仅揭示了LPS诱导HFLS-RA细胞凋亡过程中Bcl-2表达的变化规律，还通过多层面的实验证据，初步阐明了Bcl-2作为抗凋亡因子，在调控类风湿关节炎滑膜细胞命运中的关键作用，为探索类风湿关节炎的治疗新策略提供了理论依据。
