将采集自牛的血液或其他相关体液样品，经过精细处理并稀释至适宜浓度，以确保后续检测的准确性和可靠性。这一步骤如同精心调配的试剂，为后续反应奠定了坚实基础。
加样与孵育环节至关重要。将处理好的样品、标准品及试剂盒中的各种试剂，依次加入预涂有特异性抗体的微孔板中。随后，在适宜的温度下进行孵育，使样品中的抗原与微孔板上的抗体充分结合，这一过程犹如一场精心策划的化学反应，静待结果的显现。
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
洗涤步骤紧随其后，通过洗涤去除未结合的物质，犹如清洗掉杂质的清流，确保测试结果的纯净与特异性。添加酶标记二抗，并再次进行孵育。酶标记二抗如同精准的导航仪，能够准确识别并结合目标抗原，为后续的颜色反应铺平道路。加入底物液后，一场绚烂的颜色变化即将上演。底物液与酶反应产生的颜色变化，犹如彩虹般绚烂，其反应程度与目标抗原的浓度息息相关。使用酶标仪测定颜色变化的光密度，通过与标准曲线对比，即可精准计算出样品中牛腺病毒3型的浓度。这一步骤如同揭开谜底的时刻，将检测结果清晰呈现。整个操作过程，犹如一场精密的科学实验，每一步都凝聚着专业与智慧，为牛腺病毒的精准防控提供了有力支持。
