细胞不贴壁的原因复杂多样，除了培养条件不适宜这一常见因素外，还可能与细胞本身的特性、培养基成分、培养器皿的处理以及外部环境因素密切相关。例如，某些细胞系天生就具有较低的贴壁能力，或者经过多次传代后，其贴壁性能会逐渐减弱。此外，培养基中的营养成分不足或比例失衡，以及培养器皿未经适当处理，如残留有抑制剂或污染物，都会直接影响细胞的贴壁生长。
针对细胞不贴壁的问题，我们可以采取一系列有效的解决方法。首先，优化培养条件是关键，包括调整培养基的配方，确保营养成分充足且比例适宜，同时控制适宜的温度、pH值和气体环境。其次，对于贴壁性能较弱的细胞系，可以尝试使用特制的培养基质，如胶原蛋白、明胶或聚赖氨酸等，这些物质能够增强细胞与培养器皿之间的黏附力。此外，定期更换新鲜的培养基，及时清除代谢产物和细胞碎片，也是维持细胞良好贴壁状态的重要措施。
下面是针对这些问题的原因和解决方法：
可能原因：
1.胰蛋白酶消化过度 ；
2.支原体污染 ；
3.培养基pH值过碱（NaHCO3分解）；
4.细胞老化 ；
5.接种细胞起始浓度太低或太高 。
解决方法：
1.缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度；
2.分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物；
3.使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2 ；
4.启用新的保种细胞 ；
5.调节最佳接种细胞浓度。
可能原因：
1.培养液中含钙、镁离子 ；
2.支原体污染；
3.蛋白酶过度消化使得细胞裂解；
4.DNA污染 。
解决方法：
1.用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻巧吹吸细胞获得单细胞悬液；
2.分离培养物，检测支原体；
3.用DNaseI处理细胞。
可能原因：
1.由于更换不同培养液或血清；
2.培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏；
3.培养物中有少量细菌或真菌污染；
4.试剂保存不当；
5.接种细胞起始浓度太低；
6.细胞已老化；
7.支原体污染 。
解决方法：
1.比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验，让细胞逐渐适应新培养液；
2.换入新鲜配置培养液，或补加谷氨酰胺及生长因子；
3.用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物；
4.血清需保存在-10到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存，需在1周内用完；
1.增加接种细胞起始浓度；
2.换用新的保种细胞；
3.分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。
可能原因：
1.细胞本身的状态
细胞传代次数多，细胞老化；
细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢；
细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长；
胰酶消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未完全分离而成团，细胞死亡；
细胞的冻存与复苏：慢冻速融。
2.污染
支原体污染；
霉菌污染。
3.培养基或血清
更换血清或培养基之前未进行验证；
选择的培养基是否合适；
培养基配制是否准确无误。
4.培养环境
CO2供应是否正常；
培养箱或摇床温度控制是否正确。
解决方法：
根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案
1.注意细胞的本身状态：如传代次数、接种量等；
2.避免产生污染（用正规、合法、可溯源的血清）；
3.要用合适的血清或培养基，最好经过验证；
4.注意实验室的环境。
可能原因：
1.培养箱内无CO2；
2.培养箱内温度波动太大；
3.细胞冻存或复苏过程中损伤；
4.培养液渗透压不正确；
5.培养液中有毒代谢产物堆积 。
解决方法：
1.检测培养箱内CO2；
2.检查培养箱内温度；
3.取新的保存细胞种；
4.检测培养液渗透压；
5.换入新鲜培养液。
