1.松开盖玻片,将制剂浸入加热至73±1°C的洗涤溶液1(0.4x SSC/0.3%NP-40)中。在溶液中轻轻摇动带有制剂的玻璃约3-5秒。培养1分钟45秒。
2.转移至洗涤溶液2(2x SSC/0.1%NP-40),再次摇动约3-5秒,并孵育30秒。
3.将玻璃边缘贴在吸收垫上,轻轻擦干,在黑暗中自然晾干。
4.使用含有DAPI或DAPI防褪色的安装介质(对于尺寸最大为22×22 mm的玻璃盖,使用10μl DAPI)。目的是以能够使用荧光显微镜观察细胞核的方式对细胞核进行染色。
5.用盖玻片覆盖,并用荧光显微镜检查。
接下来,为了确保最佳的观测效果,我们需仔细调整荧光显微镜的各项参数。首先,选择合适的物镜倍数,根据样本的复杂度和所需观察的详细程度,通常可选用40倍或60倍油镜以获得更清晰的图像。随后,调整光源强度,既要保证荧光信号足够明亮以进行准确分析,又要避免过强光线导致的荧光淬灭或样本损伤。
在观察过程中,利用显微镜的滤光片系统,选择适合DAPI染色的激发光波长(通常为358nm)和发射光波长(通常为461nm),以凸显细胞核的蓝色荧光。此时,可以清晰地看到细胞核的形态、大小和分布,这对于研究细胞周期、染色体异常或核仁结构等生物学问题至关重要。
若需进一步分析,可利用显微镜自带的图像捕捉软件,拍摄并保存高质量的荧光图像。这些图像不仅可用于当前研究的数据分析,也是未来学术交流与文献发表的重要资料。
最后,完成观察后,应小心移除盖玻片,避免对样本造成额外损伤。对于仍需保留的样本,可重新置于适当的保存液中,并标记好相关信息,以便后续研究或复查。整个荧光原位杂交技术的洗涤与观察流程至此结束,但科学的探索永无止境,每一次实验的结果都可能为我们揭示生命奥秘的新篇章。