加药实验过程中对CCK-8测定的影响：

（1）注意如果药物具有还原性,会和CCK-8发生显色反应,增加吸光度。

（2）药物中的金属对CCK-8显色有影响:当终浓度为1mM的氯化亚铅、氧化铁、硫酸铜会抑制5%,15%, 90%的显色反应,使灵敏度降级。如果终浓度是10mM的话，将会100%抑制。

解决办法

首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入CCK-8,测定450nm的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基(加CCK-8)的吸光度高,则证明药物有影响,可在加CCK-8之前更换培养基,去掉药物的影响。

（3）由于培养基中可能含有氧化还原反应的物质,在正式实验之前,建议使用一个孔作一下检测,有必要先确认培养基和CCK-8是否反应。一般正常的0D值应该在0.4以下。

 空白对照

在不含细胞的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时,还应考虑药物的吸收,可在不含细胞,加入药物的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450nm的吸光度作为空白对照。

灵敏度影响

（1）对于不同的细胞，灵敏度不一样，悬浮细胞较贴壁细胞难染色。

（2）对于贴壁细胞,一般加入CCK-8培养1-4小时吸光度已经很高，但对于悬浮细胞则可能吸光度较低，可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。

细胞黏附性

（1）以层粘连蛋白(Ln)包被96孔板,通过计算不同时间点孔板中贴壁细胞的数量反映细胞的黏附性。

（2）细胞的黏附性越强,则单位时间内贴于铺有Ln板底的细胞数量越多，去除尚未贴壁的细胞后，应用CCK-8等方法计量细胞数量便可间接反映不同细胞或不同处理的细胞黏附能力的差异。

药物浓度检测

将细胞培养后按照不同浓度的药物处理-定时间后进行CCK-8检测，根据吸光度绘制曲线,计算该药物抑制细胞数量一半时的浓度(IC50)。

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