注意事项

 

1. 常规消化收集细胞离心。

 

2. 离心后去掉离心管内上清，加入1ml左右重悬细胞混匀，建议轻轻晃动或者轻轻吹打细胞， 放入培养箱消化细胞，再消化1min左右。

 

3. 消化好后，用移液枪轻轻吹打细胞悬液，使细胞团分散，迅速加入3-5ml含血清的培养基混匀以终止消化，离心去除

 

4. 加入5ml左右的细胞相应的培养基混匀，按比例接入培养瓶/皿中。

 

5.显微镜下观察看细胞是否成均匀分散的单细胞，若有少量成团的小细胞团可不用重新消化，使之贴壁后待细胞生长稳定后再消散细胞。

 

常温发货

 

收到后T25瓶消毒再放置培养箱静置2-3小时后观察密度和状态拍照2-3张反馈给销售，密度达标就可以传代。前期传代比例1:2，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成1个1ml冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存2-3只后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。

 

干冰发货常规细胞发货冻存管2只，复苏1只，另外一只备用，第一个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知我们。

 

贴壁细胞

 

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

 

2. 加入0.25％(w / v）0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化３.３.３.３.3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培养皿中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

 

4. 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

 

５. 运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。

 

悬浮细胞

 

HEP-53.4 小鼠肝癌细胞悬浮状态下生长的细胞在HEP-53.4小鼠肝癌细胞悬浮状态下的深入研究中，我们观察到了一种前所未有的细胞适应性与增殖特性。这些细胞在脱离传统贴壁培养环境后，不仅未显现出生长抑制或凋亡的迹象，反而展现出了一种更为活跃的代谢状态和增殖速率。通过高分辨率显微镜的实时监测，我们可以清晰地看到细胞间的动态交互变得更加频繁，它们似乎在通过某种未知的机制交换着生长信号与营养物质，共同维持着悬浮体系中的生态平衡。

 

进一步的分析揭示了悬浮状态下细胞骨架结构的微妙变化。与贴壁时相比，这些细胞的微管与微丝网络更加灵活多变，能够迅速响应外部环境的微扰，从而确保细胞在三维空间中的稳定悬浮与高效迁移。这种结构上的适应性调整，很可能是细胞在悬浮条件下生存与繁衍的关键策略之一。

 

此外，我们还发现悬浮培养的HEP-53.4细胞在分泌因子谱上发生了显著变化。一系列与细胞增殖、迁移及抗凋亡相关的蛋白质表达上调，这些变化不仅增强了细胞的生存能力，还可能促进了肿瘤微环境的重塑，为细胞的进一步扩散与侵袭铺平了道路。

 

为了验证这些发现的临床意义，我们正着手构建模拟体内循环系统的体外培养模型，以更贴近生理条件地研究悬浮状态下肝癌细胞的生物学行为。同时，我们也在积极探索针对这一特殊生长状态的有效干预策略，旨在为肝癌的治疗开辟新的途径。未来的研究将聚焦于揭示悬浮细胞特有的信号通路与调控机制，以及这些机制如何影响肿瘤的发生、发展与治疗响应，最终为改善患者预后提供科学依据。

​，可以通过向培养瓶中添加培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×10⁵~1×10⁶个/mL(不同细胞对密度要求不同）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:4的比例进行。

 

运输形式低温：1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

 

常温: T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。