免疫细胞化学（ICC）和免疫荧光（IF）实验方案是生物学研究中常用的两种重要技术，它们在细胞生物学、分子生物学和病理学等领域具有广泛的应用。

   免疫细胞化学（ICC）是一种通过特异性抗体与细胞内的抗原结合，来揭示细胞内部结构和功能的实验方法。这种方法主要利用抗体的高度特异性和敏感性，结合化学标记物，通过显色反应来定位抗原在细胞内的位置。ICC实验方案通常包括细胞固定、抗原修复、抗体孵育、显色反应和观察等步骤。通过精心设计和优化实验条件，研究人员可以准确地了解抗原在细胞内的分布和表达情况，从而揭示细胞的生命活动规律和疾病发生机制。

      

    免疫细胞化学（ICC）是实验方案则是一种利用荧光标记物来检测细胞内抗原分布的方法。与ICC相比，IF具有更高的灵敏度和分辨率，能够在单个细胞水平上进行精确的抗原定位。IF实验方案通常包括细胞固定、抗原修复、抗体孵育、荧光标记和观察等步骤。通过荧光显微镜的观察，研究人员可以直观地看到抗原在细胞内的荧光信号，从而确定抗原的位置和分布。

 

一般流程

 

1.       用聚乙烯亚胺或多聚赖氨酸涂覆盖玻片，在室温下放置 1 小时。

 

2.       用无菌水充分漂洗盖玻片 3 次，每次 1 小时。

 

3.       充分干燥盖玻片，在紫外光下灭菌至少 4 小时。

 

4.       使细胞在玻璃盖玻片上生长，或制备 Cytospin 或涂片制备物。

 

5.       用磷酸盐缓冲液 (PBS) 简单漂洗。

 

推荐使用 1 × PBS 0.1% Tween 20 作为洗涤缓冲液。

固定

 

可使用以下两种方法中的一种固定细胞：

 

1.       室温下，在 100% 甲醇（-20 ℃ 冷冻）中孵育细胞 5 分钟。

 

2.       室温下，在 4% 多聚甲醛（溶于 PBS 中，pH 7.4）中孵育细胞 10 分钟。

 

用冰 PBS 洗涤细胞 3 次。

抗原修复（可选步骤）

在抗原修复缓冲液对细胞进行加热处理后，有些抗体的效果会更好。查看产品信息，了解每种一抗的使用建议。

 

1.       将抗原修复缓冲液（100 mM Tris，5% [w/v] 尿素，pH 9.5）预热至 95 ℃。具体方法为：将装有缓冲液的盖玻片染色缸置于水浴锅中，水浴锅的温度设为 95 ℃。

 

2.       用小型宽头镊子小心将盖玻片置于盖玻片染色缸内的抗原修复缓冲液中，记下长有细胞的盖玻片面。

 

3.       在 95 ℃ 下加热盖玻片 10 分钟。

 

4.       从抗原修复缓冲液中取出盖玻片，浸入 6 孔组织培养板内的 PBS 溶液中，保持长有细胞的一面朝上。

 

5.       用 PBS 洗涤细胞 3 次，每次 5 分钟。

   总之，免疫细胞化学（ICC）是和免疫荧光实验方案是生物学研究中不可或缺的重要工具。它们的应用不仅有助于深入了解细胞结构和功能，还为疾病诊断和治疗提供了有力的支持。随着技术的不断发展，这些实验方案将在生物学研究中发挥更加重要的作用。

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