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单宁酶(Tannase,TAN)试剂盒分光光度法注意事项

点击次数:107次     发布时间:2024/4/7 10:59:52

     单宁酶是一种重要的酶类,在科研实验中扮演着不可或缺的角色。而在使用单宁酶试剂盒进行分光光度法实验时,我们需要注意一些关键事项。首先,要确保实验环境干净卫生,避免污染和干扰。其次,在准备试剂和样品时,要严格按照说明书进行,避免误差和偏差。此外,实验过程中要注意控制温度和光照条件,以保证实验结果的准确性和可靠性。
同时,我们还需要注意实验器材的清洁和消毒,避免交叉污染。在使用单宁酶试剂盒时,我们还应该了解该酶的特性。单宁酶广泛存在于微生物和植物中,能够水解带有两个苯酚基的酸,如鞣酸。它在处理啤酒、制造速溶茶以及去除柿子涩味等方面都有着广泛的应用。
注意:
 
可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行5min 95℃沸水浴处理。
 
TAN活力单位的计算
 
标准条件下测定回归方程为y = 0.0058x + 0.0044,R2 = 0.9994;x为PG含量(μmol/L),y为吸光值。
 
1、按样本体积计算
 
单位的定义:40℃下每毫升粗酶液每分钟水解减少0.01μmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位。
 
TAN活性(μmol/min/mL)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷V样÷T
 
=34.48×( ΔA-0.0044)
 
2、按照蛋白浓度计算
 
单位的定义:40℃下每毫克蛋白每分钟水解减少0.01μmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。
 
TAN活性((μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷(V样×Cpr)÷T
 
=34.48×(ΔA-0.0044)÷Cpr
 
3、按照样本鲜重计算
 
单位的定义:40℃下每克样品每分钟水解减少0.01μmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。
 
TAN活性(μmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷(V样÷V样总×W)÷T
 
=34.48×(ΔA-0.0044)÷W
 
V反总:反应体系总体积,1mL; V样:加入样本体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,10min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
   单宁酶试剂盒的分光光度法实验需要我们精心准备和操作,确保实验结果的准确性。让我们一起探索单宁酶的奥秘,为科研事业贡献力量!

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