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人胚肺细胞VA13细胞传代方法

点击次数:69次     发布时间:2024/4/2 11:54:33

人胚肺细胞VA13细胞传代方法:
1.尽量吸干净T25瓶原培养基;
2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s,吸走润洗的PBS;
3.T25瓶加1ml左右胰酶,轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层;
4.将培养瓶放入37度培养箱消化;
5.消化到细胞间隙变大,但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化;
6.混匀细胞,900rpm离心3-5min,弃上清;
7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里;
8.补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养;
特征特性:该细胞系衍生自WI-38细胞。WI-38细胞感染低滴度的SV40病毒,经过连续传代、克隆选择获得多株亚系,其中2RA亚系含有SV40 neo (T)和转移抗原,从而改变其有限细胞系的特性,可在常规条件下连续传代。该细胞系的实验操作甚少在生物安全P2级条件下进行。
冻存方法:
1.消化并离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞;
2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管;
3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20度静置2h后转入-80度过夜,第二天转入液氮保存。
注意事项冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方法。

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