1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

 

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50%l。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40%l，然后再加待测样品 10%l。加样将样品加 于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

 

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

 

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

 

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

 

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50%l，空白孔除外。

 

7. 温育：操作同 3。

 

8. 洗涤：操作同 5。

 

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50%l，再加入显色剂 B50%l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50%l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

 

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。