1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

 

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；  

 

3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。  

 

4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

 

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

 

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

 

7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。