1. DNA模板

 

2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）

 

3．10×PCR Buffer

 

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

 

5．Taq酶操作步骤 

 

1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

 

      10×PCR buffer             5μl

 

      dNTP mixl                 4μl

 

       引物1（10pM）               2μl

 

       引物2（10PM）              2μl

 

       Taq酶（2U/μl）            1μl

 

      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

 

      加ddH2O至               50 μl

 

    视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

 

2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。

 

3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

 

4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。