ELISA试剂盒在实验中经常会动到哪些常见问题1. ELISA实验反应时间不同是由什么决定的？答：抗原与抗体、抗体与酶标抗体反应一般在37℃ 2h～3h达到高峰。时间太短,敏感性下降,时间太长,吸附的抗原或复合物(在这个温度下)可能脱落。酶底物反应时间的确定：一般采用15min～30min～45min。也可以标准阳性血清为准,随时测定其OD值,当达到规定的OD值时,即终止反应。2. 稀释的抗体如何保持其稳定性？3. 如何客服批间差异较大的缺陷？4. 显色体系的稳定性如何保持？5. 在试剂盒的研发过程中什么最重要？是抗体吗？（一） 显色淡，灵敏度偏低可能原因及解决方法？我们在做实验时，常会遇到elisa试剂盒显色淡灵敏度偏低的问题，以下是根据不同问题可能原因及其防止方法总结，仅供参考：可能原因及防止方法：1．孵育反应时间不足定时钟准确定时 2．洗涤时冲击力太大，洗涤液浸泡时间太长，洗涤次数增加减少洗涤冲击力，按说明书要求保留洗涤时间，准确记住洗涤次数3．显色剂滴加量不足或顺序颠倒，或混合后加入滴加显色液时，滴瓶垂直向下，持力均匀，滴速不宜过快，先加显色剂 A，反加显色剂B，不可将A、B液混合后加入4．显色剂反应时间不足准确定时5．蒸馏水水质有问题测定蒸馏水配制试剂对酶免疫法的影响6．试剂盒在运输途中时间太长，温度太高试剂盒置保温箱内运输，并放足够数量的冰块，尽量缩短运输时间7．试剂、样品用前未能平衡用前试剂、样品置室温平衡 30分钟左右。8．样品和NaN 3 防腐，抑制了酶的反应样品不能加 NaN 3 防腐9．试剂盒超过有效期超过效期试剂盒不要使用10．试剂开启时间过长长菌试剂开启后请尽量在短时间内用完11．移液器吸量不足，移液抽吸排放太快，吸头内壁挂液太多或内壁不清洁校正移液器，吸头要配套，每次装吸头要吻合紧密。移液不宜过快，排放应完全。吸头内壁要清洁，最好一次性使用。12．恒温箱温度不足37℃或水浴锅水温度不足37℃）放入反应板时注意培养箱温度，及时调整，孵育反应期间开启不宜太多，影响温度平衡。（二） 背景深，全部都有色可能原因及解决方法？1. 洗涤不充分，洗后为拍干，样品中有其他成分残留或酶标记物残留浓缩洗液准确配置；10倍浓缩洗涤液如有结晶则应让结晶于室温全部溶解后再量取稀释;充分洗涤，彻底拍干，加样或者加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染。2. 样品污染。样本应新鲜采集或低温保存，防止污染。3. 培养箱温度超过37℃或反应时间过长调整培养箱温度，准确定时。4. 吸嘴重复使用，为洗净或消毒不彻底吸嘴尽可能一次性使用5. 蒸馏水污染使用新鲜的蒸馏水6. 酶等试剂混用。不同批号试剂勿混用。7. 一次实验的样本量过多，加样时间太长，导致实际反应时间延长。合理安排实验，避免几块酶标板同时加样。（三） 重复性不佳可能原因及解决方法？1. 样品数量多少不一，加样时间有长有短。重复某一样品时，加样时间尽可能与第一次接近。2. 保温时间不一致，洗涤条件不一致，操作人员不一致。重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性。3. 加样量不一致。样本稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴。。（四） 出现白板，阳性对照不显色可能原因及解决方法？1. 显色液变质更换新的显色液2. 洗涤液配置有误请按说明书所示稀释倍数配制。3. 未加酶结合物而认为已加入注意不要漏加4. 终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用每次加液前需看清标签。