锰盐营养琼脂培养基的配制：

 

1）、Camp-BAP固体培养基的配制：

称取8.92g培养基，溶于200ml蒸馏水中高压灭菌，待冷却至55°C左右加入200ul添加剂A、200ul添加剂B和10ml脱纤维裂解羊血，充分摇匀后倒平板。(添加剂A和B为购买附带)。

2）、Skirrow固体培养基的配制：

称取8.5g培养基，溶于200ml蒸馏水中高压灭菌，待冷却至55°C左右加入2ml FBP原液和10ml脱纤维裂解羊血，充分摇匀后倒平板。

FBP原液配置：

分别称取0.5g焦亚硫酸钠、0.5g丙酮酸钠和0.5g硫酸亚铁，溶于20ml蒸馏水中，滤膜过滤除菌，放置4°C冰箱可保存一周。

3）、布氏肉汤增菌液的配制：

称取28.1g布氏肉汤粉末，溶解于1000ml蒸馏水中高压灭菌，冷却后备用。

 

2、锰盐营养琼脂培养基增菌培养

宽鳞大孔菌将新鲜食品，如鸡肉，减碎，取5g置于50ml离心管中，加入布氏肉汤至液面覆盖鸡肉样品，拧紧离心管，先在37°C下预增菌4小时，在加入100 ul头孢哌酮（30mg/ml），并颠倒混匀，放置在微需氧培养箱中42°C培养48小时。

 

3、分离纯化

 

用接种环沾取增菌液划线于Skirrow血平板上，在平板上挑取不溶血、灰色、有光泽、且边缘整齐发亮的菌落在Camp-BAP平板上纯化，挑取扁平、灰色、像水滴样菌落多次纯化后保存。

 

4、菌株培养

 

将纯化的弯曲杆菌单菌落接种到Skirrow血平板上，放置在42°C的微需氧环境下培养48小时，观察细菌生长状态。微需氧条件的创造可用微需氧产气袋和密闭培养罐，也可以用微需氧培养箱（三气培养箱）培养。

 

5、锰盐营养琼脂培养基菌株保存方法

 

挑取单克隆菌株在Skirrow固体培养基上平板划线，放置在42°C的微需氧环境下培养48小时，用灭菌棉签从平板上刮下长出的菌落，悬浮在50%甘油的布氏肉汤保种液中，置于-80°C超低温保存。在-20°C冰箱中保存效果较差，存放一周后细菌复苏率即显著下降。此外，保存菌株需要每隔一年重新活化保存一次。