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福尔马林-氯化锌固定液(10%)细胞具体步骤

点击次数:1186次     发布时间:2020/10/15 15:25:57

福尔马林-氯化锌固定液(10%)细胞具体步骤
细胞一. 水的制备:
细胞培养用水必须非常纯净,不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水
二.PBS的制备与消毒(也可用于其它BSS,如:Hanks,D-Hanks液的配制):
1.溶解定容:将药品(NaCl 8.0g,KCl 0.2g,Na2HPO4·H2O 1.56g,KH2PO40. 2g )倒入盛有双蒸水的烧杯中,玻璃棒搅动,充分溶解,然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml,摇匀即成新配制的PBS溶液。
2.移入溶液瓶内待消毒:将PBS倒入溶液瓶(大的吊针瓶)内,盖上胶帽,并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。
三. 胰蛋白酶溶液的配制与消毒:
胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关,在pH为8.0、温度为37℃时,胰酶溶液的作用能力*。使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。终止消化时,可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
1.称取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液浓度为0.25%,用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水(若用双蒸水需要调PH到7.2左右)或PBS(D-hanks)液中。搅拌混匀,置于4℃内过夜。
2.用注射滤器抽滤消毒:配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器(0.22微米微孔滤膜)抽滤除菌。然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
HCT8/Taxol人结肠癌紫杉醇耐药株
A549/Taxol 人肺癌紫杉醇耐药株
hct116/L人结肠癌耐奥沙利铂细胞株
lovo/L人结肠癌耐奥沙利铂细胞株
HCT8/L人结肠癌耐奥沙利铂细胞株
BEL/L人肝癌耐奥沙利铂细胞株
SMMC7721/L人肝癌奥沙利铂耐药株
A549/L人肺癌耐奥沙利铂细胞株
HCT8/FU人结肠癌氟尿嘧啶耐药株
ovo/FU人结肠癌氟尿嘧啶耐药株
SMMC7721/FU人肝癌氟尿嘧啶耐药株
PATU-8988/FU人胰腺癌氟尿嘧啶耐药株
SGC7901/FU人胃癌氟尿嘧啶耐药株
A549/FU人肺癌氟尿嘧啶耐药株
K562/DDP人白血病顺铂耐药株
MCF7/DDP人乳腺癌顺铂耐药株
HO-8910/DDP人卵巢癌顺铂耐药株
COC1/DDP人卵巢癌顺铂耐药株
A2780/DDP人卵巢癌顺铂耐药株
HCT8/DDP人结肠癌顺铂耐药株
SMMC-7721/DDP人肝癌顺铂耐药株
Huh-7/DDP人肝癌顺铂耐药株
SGC7901/DDP人胃癌顺铂耐药株
BIU-87/DDP人膀胱癌顺铂耐药株
 

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