吲哚-3-乙酸（IAA）竞争法ELISA检测试剂盒的检测原理基于竞争性酶联免疫吸附测定法，专门用于定量检测植物组织、血清、细胞培养上清等样本中的IAA含量，广泛应用于植物生理与代谢研究领域。
核心检测原理：
该方法利用IAA作为小分子半抗原难以形成“夹心”结构的特点，采用竞争法实现高特异性检测：
固相抗体包被：微孔板预先包被特异性抗IAA抗体；
竞争结合反应：将待测样本（或标准品）与酶标记的IAA衍生物（如HRP-IAA）同时加入孔中，二者在抗体结合位点上发生竞争；
样本中IAA浓度越高 → 游离IAA占据越多抗体位点 → 酶标记IAA结合越少 → 显色信号越弱；
反之，IAA浓度越低 → 酶标记物结合越多 → 显色越强；
显色与读数：加入TMB底物后，酶催化产生蓝色产物，终止液使颜色由蓝变黄，*终在450 nm波长下测定吸光度（OD值）；
浓度计算：OD值与样本中IAA浓度呈负相关，通过标准曲线拟合即可推算出IAA含量。
优势说明：相比双抗体夹心法，竞争法更适合小分子抗原检测，避免因空间位阻导致的结合失败，显著提升检测灵敏度与准确性。
操作程序：
操作步骤：
1.吲哚-3-乙酸（IAA）竞争法ELISA检测试剂盒编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50%l。然后在待测样品孔先加样品稀释液40%l，然后再加待测样品10%l。加样将样品加 于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50%l，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 A50%l，再加入显色剂 B50%l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
10.终止：每孔加终止液 50%l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.
测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。
测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
注意事项：
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 1530 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。
吲哚-3-乙酸（IAA）竞争法ELISA检测试剂盒保存条件及有效期：
1．试剂盒保存：；28℃。
2．有效期：6 个月
上海莼试生物技术有限公司
